??????? HPLC 色譜儀器可以是一組單獨(dú)的模塊或元件，但也可以設(shè)計(jì)為單個(gè)裝置。模塊概念在單個(gè)組件失效的情況下更加靈活；此外，系統(tǒng)各個(gè)零件不必來(lái)自同一制造商。如果您不喜歡自己進(jìn)行小修，您會(huì)更喜歡緊湊型儀器。然而，這并不需要比模塊化套件更少的工作臺(tái)空間。
??????? 一臺(tái) HPLC 儀器至少具有溶劑罐、帶篩板的傳輸線、高壓泵、進(jìn)樣裝置、色譜柱、檢測(cè)器組成部分。
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??????? 一、高效液相色譜儀
??????? HPLC 儀器通常由九個(gè)基本組件組成：流動(dòng)相/溶劑容器、溶劑輸送系統(tǒng)、樣品引入裝置、色譜柱、柱后裝置、檢測(cè)器、數(shù)據(jù)收集和輸出系統(tǒng)、檢測(cè)器后洗脫液處理以及連接管和配件。使用一種以上的溶劑是很常見(jiàn)的，因此需要混合器和控制器。如果數(shù)據(jù)采集是由計(jì)算機(jī)完成的，它也可以用于整個(gè)系統(tǒng)的控制。
??????? 二、溶劑罐
??????? 滿足系統(tǒng)不間斷運(yùn)行的足量HPLC溶劑的儲(chǔ)存，并由特氟龍管通過(guò)在線脫氣和過(guò)濾器輸送到泵中。一般來(lái)說(shuō)，一個(gè)系統(tǒng)中至少有兩個(gè)儲(chǔ)液器，通常是玻璃瓶。儲(chǔ)液罐及其附件將由玻璃、特氟隆或不銹鋼材料制成，這樣流動(dòng)相就不會(huì)受到污染。通常，我們使用 HPLC 級(jí)甲醇、乙腈、水和緩沖液作為流動(dòng)相。流動(dòng)相最好是新鮮調(diào)配，如果靜置4-5個(gè)小時(shí)都有可能會(huì)發(fā)生污染，因此建議流動(dòng)相進(jìn)入系統(tǒng)前，使用恒譜生溶劑過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾處理，過(guò)濾污染物。
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??????? 二、泵
??????? HPLC 泵將能夠以不同的流速使用單個(gè)或多個(gè)容器以無(wú)脈沖輸出吸取溶劑，以允許來(lái)自多個(gè)容器的不同溶劑/流動(dòng)相的受控混合。往復(fù)泵、注射泵和氣動(dòng)泵是 HPLC 泵的類型。泵的作用是迫使液體（稱為流動(dòng)相）以特定流速通過(guò)液相色譜，以毫升每分鐘 (mL/min) 表示。
??????? HPLC中的正常流速在1-2mL/min 范圍內(nèi)。在色譜實(shí)驗(yàn)期間，泵可以輸送恒定的流動(dòng)相組成（等度）或增加的流動(dòng)相組成（梯度）。
??????? 三、混合單元
??????? 混合單元用于混合不同比例的溶劑并通過(guò)色譜柱子。
??????? 有兩種類型的混合單元：低壓混合室，使用氦氣對(duì)溶劑進(jìn)行脫氣；高壓混合室不需要氦氣來(lái)脫氣溶劑。
??????? 溶劑的混合使用裝有珠子的靜態(tài)混合器或使用磁力攪拌器并在高壓下運(yùn)行的動(dòng)態(tài)混合器來(lái)完成。
??????? 四、溶劑脫氣
??????? 有幾種氣體可溶于有機(jī)溶劑。在高壓下泵送溶劑時(shí)，會(huì)形成氣泡，這會(huì)干擾分離過(guò)程、穩(wěn)定的基線和峰的形狀。因此需要進(jìn)行脫氣。這可以通過(guò)使用以下技術(shù)來(lái)完成：
??????? 真空過(guò)濾：可以去除氣泡，但并不總是可靠和完整。
?????? 氦氣吹掃：通過(guò)使氦氣通過(guò)溶劑。這是非常有效但昂貴的。
??????? 超聲波：通過(guò)使用超聲波儀，將超高頻轉(zhuǎn)換為機(jī)械振動(dòng)。這導(dǎo)致氣泡的去除。
???????五、色譜柱
???????色譜柱是 HPLC 系統(tǒng)的核心，它實(shí)際上會(huì)分離樣品混合物中的分子。柱子位于進(jìn)樣器后，流動(dòng)相與固定相接觸，形成與巨大表面的界面。近年來(lái)大多數(shù)色譜的發(fā)展導(dǎo)致設(shè)計(jì)了許多不同的方法來(lái)增加這種界面接觸。通常 HPLC 色譜柱的長(zhǎng)度為 30 至 250 毫米，直徑為 01 至 05 毫米，孔徑為 03、05 和 10 微米。色譜柱填充了多孔顆粒，由聚合物制成，并由一層薄薄的二氧化硅和聚苯乙烯（例如 C8、C18 色譜柱）。恒譜生ODS-AQ反相硅膠色譜柱是采用鍵合距離優(yōu)化技術(shù)的C18柱，嚴(yán)格控制硅膠表面鍵合C18長(zhǎng)鏈之間的距離，加大固定相與流動(dòng)相尤其是水的接觸面，從而提高極性化合物的保留力。
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???????管道結(jié)構(gòu)材料：
???????不銹鋼（最受歡迎，具有高壓能力），恒譜生的色譜柱空柱管總成都是采用醫(yī)療衛(wèi)生級(jí)的不銹鋼材質(zhì)，可耐高壓不易損壞。
???????玻璃（主要用于生物分子）
???????PEEK（聚醚醚酮）聚合物（對(duì)大多數(shù)溶劑具有生物相容性和化學(xué)惰性）
???????六、探測(cè)器
???????檢測(cè)器是用于檢測(cè)從色譜柱中洗脫的樣品和色譜柱流出物的工具。檢測(cè)器將數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為電信號(hào)并由系統(tǒng)記錄。最常見(jiàn)的檢測(cè)器 UV/VIS 用于藥物分析，它允許在特定波長(zhǎng)或范圍波長(zhǎng)（使用 PDA 檢測(cè)器）上連續(xù)監(jiān)測(cè) UV 吸收。檢測(cè)器流通池中存在的成分會(huì)導(dǎo)致吸光度發(fā)生變化。
???????高效液相色譜的應(yīng)用主要是定性分析、檢查化合物的雜質(zhì)、定量分析、藥物分離鑒定成分混合物的分離和鑒定、生物制藥和藥代動(dòng)力學(xué)研究、穩(wěn)定性研究、純化等。
發(fā)布于: 2022-05-27